ارزیابی کینتیکی آنزیم نیتریک اکسید سنتاز استخراج شده از کلیه گوسفند

سابقه و هدف: نیتریک اکسید (no) از طریق نیتریک اکسید سنتاز (nos) و از ال- آرژینین تولید شده و در پروسه های فیزیولوژیکی و پاتولوژیکی متعددی از سیستم های بیولوژیکی نقش دارد. در این بررسی، فعالیت های کینتیکی nos جدا شده از کلیه گوسفند مورد ارزیابی قرار گرفت. مواد و روش ها: با استفاده از تکنیک های هموژنیزاسیون، رسوب توسط سولفات آمونیوم و کروماتوگرافی ستونی روی deae-32سلولز و'2، '5-adp-آگاروز، آنزیم nos از 500 گرم از بافت کلیه گوسفند، جدا و خالص سازی شد. در هر مرحله از روند خالص سازی این آنزیم، مقدار پروتئین و فعالیت آن با استفاده از روش های برادفورد و گریس بررسی شد. یافته ها: در این بررسی، وزن ملکولی nos کلیه گوسفند در الکتروفورزsds-page، 54 کیلو دالتون بود. فعالیت ویژه، 6/0 واحد بر میلی گرم پروتئین و بازده خالص سازی آن نیز 9/0 درصد (خلوص نسبی 20 برابر) به دست آمد. ph و دمای اپتیم این آنزیم نیز به ترتیب 4/7 و 30 درجه سانتیگراد به دست آمد و انکوباسیون پروتئین نشان داد که در محدوده دمایی 10 تا 30 درجه سانتیگراد به مدت 15 دقیقه، آنزیم پایدار می باشد. در غلظت 75 میکرو مول از سوبسترای ال-آرژینین، بیشترین فعالیت nos مشاهده شد. vmax و km آنزیم به ترتیب 250 نانو مول در دقیقه در میلی گرم پروتئین و 32/5 میکرومول به دست آمد. استنتاج: نزیم nos از کلیه گوسفند با خلوص نسبی 20 برابر خالص سازی شد و دمای اپتیمم، ph، غلظت مناسب سوبسترا، vmax و km آن به ترتیب 30 درجه سانتیگراد، 4/7، 75 میکرومول، 250 نانو مول در دقیقه در میلی گرم پروتئین و 32/5 میکرومول به دست آمد.